Asparagine synthetase Double Nickase Plasmid (h): sc-402240-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Asparagine synthetase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Asparagine synthetase Double-Nickase-Plasmid (h) und Asparagine synthetase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ASNS abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Asparagine synthetase: sc-365809
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Asparagine synthetase Double Nickase Plasmid (h) | sc-402240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Asparagine synthetase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ASNS kodiert die humane Asparagin-Synthetase, eine zytosolische Amidotransferase, die die ATP-abhängige Umwandlung von Aspartat und Glutamin zu Asparagin und Glutamat katalysiert. Diese Aktivität verknüpft die Homöostase von Aminosäuren mit dem Stickstoffstoffwechsel und unterstützt bei Nährstoffstress den biosynthetischen Bedarf durch die Integration in die Aminosäure-Antwort und die mTOR-regulierte Kontrolle der Translation. Die ASNS-Expression wird dynamisch durch zelluläre Stresssignalwege wie die ATF4-Signalisierung reguliert und beeinflusst die Anpassung an Glutaminmangel sowie Stress des endoplasmatischen Retikulums. Eine dysregulierte ASNS-Aktivität und -Expression wurde mit veränderten Stoffwechselzuständen in Verbindung gebracht, wie sie bei der Nährstoffabhängigkeit von Krebszellen beobachtet werden, sowie mit neurologischen Entwicklungsstörungen, die mit einer beeinträchtigten Asparagin-Biosynthese einhergehen.
Asparagine synthetase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ASNS-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ASNS abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ASNS-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ASNS-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.