Plásmido CRISPR de Activación (h) ARV1: sc-407460-ACT

ARV1 (homólogo de ARV1) codifica una proteína de membrana multipaso, conservada evolutivamente, localizada predominantemente en el retículo endoplásmico e implicada en la homeostasis lipídica. El ARV1 humano se ha vinculado al tráfico de esteroles y esfingolípidos, al mantenimiento de la composición de las membranas y a la coordinación de procesos dependientes del RE que influyen en la función de la vía secretora y en las respuestas celulares al estrés. A través de su papel en la organización del equilibrio lipídico y la dinámica de membrana, ARV1 puede afectar redes de señalización acopladas a la integridad de los orgánulos y a la proteostasis. La alteración de la expresión de ARV1 se ha asociado con fenotipos de neurodesarrollo y epilepsia en estudios genéticos, lo que respalda su relevancia para la investigación de mecanismos de enfermedad en contextos metabólicos y neurológicos.

ARV1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ARV1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARV1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ARV1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ARV1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARV1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ARV1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARV1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARV1 en células tumorales con expresión de ARV1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.