Plásmido CRISPR de Activación (h) Arp3β: sc-402186-ACT

ACTR3B codifica Arp3β, una proteína relacionada con la actina que se considera que contribuye a la remodelación dinámica del citoesqueleto de actina, respaldando procesos como el control de la forma celular, la formación de ondulaciones de membrana (membrane ruffling), la endocitosis y la migración celular. Como parte de redes reguladoras de la actina vinculadas a la nucleación dependiente de Arp2/3 y al ensamblaje de actina ramificada, Arp3β puede influir en la organización de la actina cortical y en las respuestas del citoesqueleto a señales de señalización. La alteración de las vías de polimerización de actina es ampliamente relevante para los mecanismos que subyacen al comportamiento invasivo, la adhesión alterada y el tráfico intracelular desregulado observados en múltiples contextos de enfermedad. Por lo tanto, la expresión de ACTR3B y su modulación funcional constituyen puntos de entrada útiles para estudiar fenotipos centrados en el citoesqueleto y la conectividad de vías en modelos de células humanas.

Arp3β El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ACTR3B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Arp3β El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ACTR3B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ACTR3B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Arp3β. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ACTR3B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Arp3β en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Arp3β en células tumorales con expresión de ACTR3B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.