Plásmido CRISPR de Activación (h) ARP-1: sc-405241-ACT

NR2F2 codifica el receptor nuclear huérfano humano ARP-1 (COUP-TFII), un factor de transcripción independiente de ligando que se une a elementos de respuesta hormonal para coordinar programas génicos que controlan el destino celular, la angiogénesis y la adaptación metabólica. ARP-1 se integra con la señalización de receptores nucleares y con redes reguladoras de la cromatina para modular el patrón del desarrollo, las transiciones epitelio-mesenquimales y la especificación vascular. La desregulación de la expresión de NR2F2 se ha relacionado con estados de diferenciación alterados y con la reprogramación transcripcional observada en fenotipos cardiovasculares congénitos y en múltiples vías relevantes para el cáncer. En modelos basados en células, ARP-1 se estudia comúnmente por sus funciones en la selección de potenciadores, los circuitos transcripcionales específicos de linaje y la interacción cruzada con vías de receptores de esteroides y retinoides.

ARP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR2F2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARP-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR2F2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR2F2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARP-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR2F2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARP-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARP-1 en células tumorales con expresión de NR2F2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.