ARMER Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409837-ACT

O ARL6IP1 humano codifica o ARMER, uma proteína de membrana localizada no retículo endoplasmático (RE) implicada na manutenção da homeostase do RE e na regulação da morte celular programada. O ARMER participa nas respostas ao stress do RE e liga a dinâmica da membrana do RE à sinalização apoptótica, influenciando a adaptação celular ao stress proteotóxico. A expressão desregulada de ARL6IP1 tem sido associada a alterações na sinalização de sobrevivência e a fenótipos de tolerância ao stress descritos em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo a biologia do cancro e a neurobiologia. Como resultado, o ARMER é frequentemente estudado em vias que controlam a função do RE, a apoptose induzida por stress e as decisões de destino celular.

ARMER O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ARL6IP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ARMER O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ARL6IP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ARL6IP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ARMER. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ARL6IP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ARMER no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ARMER em células tumorais com expressão de ARL6IP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.