Plásmido Doble Nickase (h) ARL13B: sc-417325-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ARL13B consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ARL13B (h) y el plásmido de doble nickasa ARL13B (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARL13B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ARL13B Anticuerpo (C-5): sc-515784
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ARL13B | sc-417325-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ARL13B | sc-417325-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARL13B codifica una pequeña GTPasa tipo Arf enriquecida en los cilios que favorece el ensamblaje y la estabilidad del cilio primario, así como la identidad de la membrana ciliar, coordinando de este modo el tráfico de componentes de señalización dentro del compartimento ciliar. ARL13B contribuye a la organización de la arquitectura axonemal y regula vías dependientes de cilios, incluida la señalización de Sonic hedgehog, con efectos posteriores sobre el patrón de desarrollo y los programas de diferenciación celular. La alteración de ARL13B perturba la ciliogénesis y la transducción de señales, lo que vincula su disfunción con fenotipos relevantes para las ciliopatías y con trastornos del neurodesarrollo como el síndrome de Joubert. Como GTPasa ciliar, ARL13B se utiliza ampliamente como marcador y como nodo mecanístico para estudiar la biogénesis de orgánulos, el tráfico de membranas y la compartimentalización de vías en células humanas.
ARL13B El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARL13B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARL13B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARL13B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARL13B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.