Arkadia Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403319-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ArkadiaO plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Arkadia (h) e o Plasmídeo Double Nickase Arkadia (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para RNF111. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Arkadia Anticorpo (1-KK14): sc-134270
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Arkadia Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403319-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Arkadia Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403319-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF111 codifica a Arkadia, uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING que regula a proteostase e a transcrição dependente de sinalização ao direcionar substratos específicos para degradação mediada por ubiquitina. Arkadia é um modulador-chave da sinalização TGF-β/SMAD, promovendo a atividade da via por meio da ubiquitinação de reguladores negativos e influenciando processos como a transição epitélio–mesênquima, a determinação do destino celular e a homeostase tecidual. Por controlar programas transcricionais e a estabilidade de proteínas, RNF111 tem sido investigado em contextos que incluem biologia tumoral, regulação do desenvolvimento e sinalização relacionada ao sistema imune. A desregulação da ubiquitinação dependente de Arkadia pode alterar a atividade de SMAD e a expressão gênica a jusante, tornando RNF111 um nó útil para estudar o redirecionamento de vias em modelos celulares relevantes para doenças.
Arkadia O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RNF111 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RNF111. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RNF111. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RNF111 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.