ARID3A Lentiviral Activation Particles (h2): sc-404552-LAC-2

Das menschliche Gen ARID3A kodiert einen DNA-bindenden Transkriptionsfaktor aus der Familie der AT-rich interaction domain (ARID), der die Chromatinzugänglichkeit und zelltypspezifische Genexpressionsprogramme reguliert. ARID3A ist an der Entwicklung und Aktivierung von B-Zellen beteiligt, moduliert die interferonresponsive Transkription und koordiniert Transkriptionsnetzwerke, die mit Differenzierung und Proliferation verknüpft sind. Eine dysregulierte ARID3A-Expression und veränderte regulatorische Aktivität wurden mit Immundysfunktionen und malignitätsassoziierten Transkriptionszuständen in Verbindung gebracht, darunter Kontexte, die für hämatologische Krebserkrankungen und autoimmune Phänotypen relevant sind. Die Geneditierung von ARID3A ermöglicht mechanistische Untersuchungen der Enhancer-Promotor-Kontrolle, der Linienfestlegung und zytokingetriebener Signalausgänge und unterstützt damit funktionelle Genomik-Screens sowie die Kartierung von Signalwegen in humanen Zellmodellen.

ARID3A Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ARID3A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ARID3A Lentivirale Aktivierungspartikel (h2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ARID3A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ARID3A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ARID3A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.