Plásmido CRISPR de Activación (h2) ARH1: sc-410678-ACT-2

El gen humano ADPRH codifica la hidrolasa 1 de ADP-ribosilarginina (ARH1), una enzima citosólica que elimina mono-ADP-ribosa de residuos de arginina en proteínas, revirtiendo la ADP-ribosilación específica de arginina y modulando el recambio celular de ADP-ribosa. Al contrarrestar la modificación mediada por las ART, ARH1 contribuye a la regulación de respuestas al estrés, la transducción de señales y la homeostasis proteica dentro de vías más amplias de mono-ADP-ribosilación dependientes de NAD⁺. La desregulación de la dinámica de la ADP-ribosilación en la que participa ADPRH se ha vinculado, en sistemas experimentales, con cambios en la susceptibilidad a modificaciones mediadas por toxinas y con fenotipos relevantes para la supresión tumoral y la señalización inflamatoria. La edición génica de ADPRH permite estudios mecanísticos de la ADP-ribosilación reversible, del diálogo entre vías con redes de señalización de daño en el ADN e inmunitaria, y de cribados de genómica funcional que examinan el control de modificaciones postraduccionales.

ARH1 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADPRH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ARH1 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADPRH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADPRH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ARH1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADPRH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ARH1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ARH1 en células tumorales con expresión de ADPRH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.