Plasmide CRISPR d'Activation (h) ARG1/Arginase 1: sc-418076-ACT

ARG1 humain code l’arginase 1, une métallenzyme cytosolique qui catalyse la conversion de la L-arginine en L-ornithine et en urée, constituant l’étape terminale du cycle de l’urée et un régulateur majeur de l’élimination de l’azote. En contrôlant la disponibilité intracellulaire de l’arginine, ARG1 influence la biosynthèse des polyamines et de la proline via le flux d’ornithine, et peut moduler indirectement la synthèse de l’oxyde nitrique par compétition avec les NO synthases. L’activité d’ARG1 est étroitement liée à l’homéostasie métabolique des hépatocytes et aux programmes immunométaboliques des cellules myéloïdes, où la déplétion en arginine peut façonner la réactivité des lymphocytes T et la signalisation inflammatoire. Une expression ou une fonction dérégulée d’ARG1 est associée à des troubles de la détoxification de l’ammoniac et a été impliquée dans la biologie myéloïde associée aux tumeurs, ainsi que dans d’autres contextes où le métabolisme de l’arginine est reprogrammé.

ARG1/Arginase 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARG1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ARG1/Arginase 1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARG1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ARG1/Arginase 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARG1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ARG1/Arginase 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ARG1/Arginase 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARG1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.