ARFGAP1 Double Nickase Plasmid (h2): sc-403939-NIC-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ARFGAP1 Double Nickase Plasmid (h2) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ARFGAP1 Double-Nickase-Plasmid (h2) und ARFGAP1 Double-Nickase-Plasmid (h22) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ARFGAP1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ARFGAP1: sc-271303
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ARFGAP1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403939-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche Gen ARFGAP1 kodiert das ADP-Ribosylierungsfaktor-GTPase-aktivierende Protein 1, einen Golgi-assoziierten Regulator, der die GTP-Hydrolyse bei kleinen GTPasen der ARF-Familie beschleunigt, um Vesikelknospung und Mantel-/Coat-Dynamik zu koordinieren. Durch die Modulation des COPI-abhängigen retrograden Transports sowie des Endosom–Golgi-Transports trägt ARFGAP1 zu Membrankrümmung, Cargo-Sortierung und der Aufrechterhaltung der Golgi-Architektur bei und verknüpft ARF-Signalisierung mit umfassenderen sekretorischen und Recycling-Wegen. Eine Fehlregulation des durch ARFGAP1 vermittelten Traffickings wurde in Kontexten untersucht, in denen Proteostase und Organellentransport gestört sind, einschließlich neurodegenerationsbezogener Mechanismen, die vesikulären Transport und Proteinverarbeitung betreffen. Geneditierung von ARFGAP1 ermöglicht mechanistische Studien zur Kontrolle des ARF-Signalwegs, zur Vesikelbiogenese und zur Golgi-Funktion mithilfe von Knockout-/Knock-in-Modellen, Interaktionskartierungen und Trafficking-Assays in menschlichen Zellsystemen.
ARFGAP1 Das Double-Nickase-Plasmid (h2) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ARFGAP1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ARFGAP1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ARFGAP1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ARFGAP1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.