Plasmide Double Nickase (h) ARF6: sc-400799-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ARF6 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARF6 Double Nickase (h) et le plasmide ARF6 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARF6. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARF6 Antibody (3A-1): sc-7971
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ARF6 | sc-400799-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ARF6 | sc-400799-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur d’ADP-ribosylation 6 (ARF6) est une petite GTPase qui régule le trafic membranaire, le remodelage du cytosquelette d’actine et la signalisation des phosphoinositides à la membrane plasmique et dans les compartiments endosomaux. En alternant entre des états liés au GDP et au GTP, ARF6 coordonne l’endocytose indépendante de la clathrine, le recyclage des protéines membranaires ainsi que l’adhésion et la migration cellulaires dépendantes des intégrines, en s’interfaçant avec des voies impliquant la dynamique du PI(4,5)P₂ et les GTPases de la famille Rho. Le transport vésiculaire dépendant d’ARF6 influence l’internalisation des récepteurs et la signalisation en aval, modulant des processus tels que la polarité cellulaire et la cytocinèse. Une activité d’ARF6 dérégulée a été associée à des modifications du comportement invasif et à des programmes de signalisation métastatique en biologie du cancer ; elle est également impliquée dans les mécanismes d’entrée des agents pathogènes chez l’hôte et dans des processus neurodéveloppementaux pertinents pour des modèles de maladie.
ARF6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARF6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARF6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARF6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARF6.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.