Plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF4 (m): sc-419189

Présentation

Arf4 code le facteur d’ADP-ribosylation 4 (ARF4), une petite GTPase de la famille ARF qui régule le trafic membranaire et le remodelage des lipides au niveau du Golgi et du système endosomal. ARF4 alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de coordonner le bourgeonnement des vésicules, le tri du cargo et le transport des récepteurs, notamment dans des voies contrôlant le trafic sécrétoire et le ciblage vers le cil. Par ses interactions avec les complexes de manteau/adaptateurs et le métabolisme des phosphoinositides, ARF4 contribue au maintien de l’organisation des organites et à une livraison polarisée des membranes. Une dérégulation du trafic dépendant d’ARF4 a été associée à des altérations de la signalisation des récepteurs, à des défauts de ciliogenèse et à des réponses au stress cellulaire, avec des implications en neurobiologie, dans l’homéostasie épithéliale et dans des phénotypes liés aux tumeurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ARF4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Arf4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Arf4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Arf4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ARF4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Arf4 pour l'étude de la signalisation de ARF4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Arf4 essentiels à la fonction de ARF4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Arf4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ARF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ARF4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Arf4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ARF4 plasmide HDR (m) et le ARF4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Arf4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Arf4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.