Plasmide Double Nickase (h) ARF1: sc-401608-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ARF1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ARF1 Double Nickase (h) et le plasmide ARF1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ARF1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ARF1 Antibody (ARFS 1A9/5): sc-53168
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ARF1 | sc-401608-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ARF1 | sc-401608-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le facteur d’ADP-ribosylation 1 (ARF1) est une petite GTPase qui alterne entre des états liés au GDP et au GTP afin de réguler le trafic membranaire et la dynamique des organites, en particulier au niveau de l’appareil de Golgi et du système endosomal. ARF1 actif recrute des protéines de manteau et des adaptateurs pour initier le bourgeonnement des vésicules, coordonne le métabolisme des phosphoinositides et favorise le remodelage du cytosquelette via des effecteurs en aval. Par ces fonctions, ARF1 contribue au flux de la voie sécrétoire, au recyclage des récepteurs et à la transduction de signaux associés à la croissance et à la migration cellulaires. Un trafic dépendant d’ARF1 dérégulé a été associé à des altérations de la prolifération et à des phénotypes invasifs dans des modèles de cancer, ainsi qu’à des perturbations de la fonction des neurones et des cellules immunitaires dans des contextes pertinents pour la maladie.
ARF1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ARF1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ARF1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ARF1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ARF1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.