Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 9/AQP9 (h): sc-401298

Présentation

AQP9 code l’aquaporine 9, un canal aquaglycéroporine de la membrane plasmique qui facilite le transport bidirectionnel de l’eau et de petits solutés tels que le glycérol, l’urée et d’autres métabolites neutres. En régulant le flux de glycérol, AQP9 influence l’équilibre énergétique cellulaire et le métabolisme lipidique, soutenant des processus incluant la néoglucogenèse et l’homéostasie osmotique dans les tissus à forte activité métabolique. Dans des contextes immunitaires et épithéliaux, une activité modifiée d’AQP9 a été associée à des changements de la fonction des cellules inflammatoires et de la physiologie de barrière, reliant son expression à des voies qui couplent le transport membranaire aux réponses métaboliques et au stress. Une expression dérégulée d’AQP9 a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, notamment les troubles métaboliques et des phénotypes associés au cancer, où le transport des solutés peut façonner les programmes de prolifération et de survie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 9/AQP9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène AQP9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du AQP9, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert AQP9 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aquaporin 9/AQP9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en AQP9 pour l'étude de la signalisation de Aquaporin 9/AQP9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de AQP9 essentiels à la fonction de Aquaporin 9/AQP9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de AQP9 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aquaporin 9/AQP9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aquaporin 9/AQP9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus AQP9. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aquaporin 9/AQP9 plasmide HDR (h) et le Aquaporin 9/AQP9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie AQP9 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles AQP9 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.