Aquaporin 4/AQP4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400258-NIC

O gene humano AQP4 codifica a aquaporina-4, um importante canal de água enriquecido nos pés perivasculares dos astrócitos, que permite o rápido movimento bidirecional de água através da membrana plasmática e ajuda a manter a homeostase hídrica do cérebro. Ao se acoplar ao fluxo iônico e à neurotransmissão, a AQP4 contribui para a regulação do volume dos astrócitos, a dinâmica do espaço extracelular e os processos de transporte glinfático que influenciam a depuração de solutos intersticiais. Sua localização polarizada na membrana é coordenada com complexos de ancoragem perivasculares e está intimamente ligada à fisiologia da barreira hematoencefálica e às respostas ao estresse osmótico. A desregulação da expressão ou da localização da AQP4 tem sido associada a distúrbios neuroinflamatórios e desmielinizantes, edema cerebral e alteração da suscetibilidade a crises, tornando-a um alvo-chave para estudos mecanísticos do equilíbrio de fluidos no SNC e da biologia glial.

Aquaporin 4/AQP4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus AQP4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de AQP4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função AQP4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com AQP4 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.