Aquaporin 3/AQP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419174

Panoramica

Aqp3 codifica l’acquaporina 3 (AQP3), un canale di membrana plasmatica della famiglia delle acquagliceroporine che facilita il trasporto transmembrana di acqua, glicerolo e altri piccoli soluti, influenzando l’equilibrio osmotico cellulare e la disponibilità di substrati metabolici. In tessuti murini quali rene, cute ed epitelio gastrointestinale, AQP3 contribuisce all’idratazione della barriera epiteliale, alla regolazione del volume e al metabolismo energetico dipendente dal glicerolo, collegando il trasporto di membrana all’adattamento allo stress e alla proliferazione. L’attività di AQP3 può modulare la segnalazione legata allo stato redox attraverso effetti sui flussi intracellulari di soluti ed è spesso studiata in contesti di omeostasi epiteliale, infiammazione e rimodellamento. Un’espressione o localizzazione deregolata di AQP3 è stata associata a una riparazione delle ferite alterata e a fenotipi cutanei infiammatori, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici della funzione di barriera e della disfunzione epiteliale associata a malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 3/AQP3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aqp3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aqp3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aqp3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aquaporin 3/AQP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aqp3 per lo studio della segnalazione di Aquaporin 3/AQP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aqp3 critici per la funzione di Aquaporin 3/AQP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aqp3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aquaporin 3/AQP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aqp3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aquaporin 3/AQP3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aquaporin 3/AQP3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aqp3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aqp3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.