Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 3/AQP3 (m): sc-419174

Présentation

Aqp3 code l’aquaporine 3 (AQP3), un canal aquaglycéroporine de la membrane plasmique qui facilite le transport transmembranaire de l’eau, du glycérol et d’autres petits solutés, influençant l’équilibre osmotique cellulaire et la disponibilité de substrats métaboliques. Dans des tissus murins tels que le rein, la peau et l’épithélium gastro-intestinal, AQP3 contribue à l’hydratation de la barrière épithéliale, à la régulation du volume cellulaire et au métabolisme énergétique dépendant du glycérol, reliant ainsi le transport membranaire à l’adaptation au stress et à la prolifération. L’activité d’AQP3 peut moduler la signalisation liée au redox via ses effets sur les flux intracellulaires de solutés, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes d’homéostasie épithéliale, d’inflammation et de remodelage. Une expression ou une localisation dérégulée d’AQP3 a été associée à une réparation des plaies altérée et à des phénotypes cutanés inflammatoires, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques de la fonction barrière et des dysfonctionnements épithéliaux associés aux maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 3/AQP3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aqp3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aqp3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aqp3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aquaporin 3/AQP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aqp3 pour l'étude de la signalisation de Aquaporin 3/AQP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aqp3 essentiels à la fonction de Aquaporin 3/AQP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aqp3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aquaporin 3/AQP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aquaporin 3/AQP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aqp3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aquaporin 3/AQP3 plasmide HDR (m) et le Aquaporin 3/AQP3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aqp3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aqp3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.