APPL1 Lentiviral Activation Particles (m): sc-428481-LAC

Appl1 kodiert APPL1, ein endosomales Adapterprotein, das Rab5-positive frühe Endosomen mit der Signaltransduktion verknüpft und Signale von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie Adiponektinrezeptoren integriert. Über Interaktionen mit AKT und weiteren Signalintermediären moduliert APPL1 die PI3K–AKT-Signalkaskade, die Insulinsensitivität und die Glukosehomöostase und beeinflusst zudem den endozytotischen Transport sowie das Rezeptor-Recycling. In Maus-Zellen wurde APPL1 zur Untersuchung des Cross-talks zwischen Stoffwechsel- und Wachstumsfaktor-Signalwegen eingesetzt, einschließlich der Regulation AMPK- und MAPK-assoziierter Antworten. Eine Fehlregulation der APPL1-abhängigen Signalgebung ist für mechanistische Forschung zu metabolischen Funktionsstörungen, Gefäßbiologie und entzündungsassoziierten Phänotypen relevant.

APPL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Appl1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

APPL1 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Appl1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen APPL1-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Appl1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.