Plásmido Doble Nickase (m) APP/Amyloid Precursor Protein: sc-419170-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)APP/Amyloid Precursor Protein consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa APP/Amyloid Precursor Protein (m) y el plásmido de doble nickasa APP/Amyloid Precursor Protein (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a App. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: β-Amyloid Anticuerpo (B-4): sc-28365
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) APP/Amyloid Precursor Protein | sc-419170-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) APP/Amyloid Precursor Protein | sc-419170-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La App murina codifica la proteína precursora del amiloide (APP), una glicoproteína transmembrana de tipo I que se transporta a través de los sistemas secretor y endocítico, donde favorece el crecimiento de neuritas, la formación de sinapsis y la señalización intracelular. La APP es procesada proteolíticamente por las secretasas α, β y γ, lo que la vincula con la proteólisis intramembrana regulada y con la generación de fragmentos bioactivos que influyen en la homeostasis neuronal. Su procesamiento se interrelaciona con el tráfico de membranas, la organización de balsas lipídicas y las vías de señalización dependientes de calcio, y se estudia ampliamente en el contexto de la neurodegeneración. La escisión desregulada de la APP y la producción alterada de fragmentos son ejes centrales de la investigación mecanística sobre la biología del amiloide, la neuroinflamación y la disfunción sináptica en modelos de enfermedad de Alzheimer.
APP/Amyloid Precursor Protein El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus App en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de App. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de App. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con App alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.