Plasmide Double Nickase (h) APNG: sc-404850-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) APNG correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide APNG Double Nickase (h) et le plasmide APNG Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MPG. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: APNG Antibody (D-2): sc-390684
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) APNG | sc-404850-NIC | 20 µg | $410.00 |
MPG humain code la N‑méthylpurine ADN glycosylase (APNG/AAG), une enzyme clé d’initiation de la voie de réparation par excision de base (BER) qui reconnaît et excise des lésions de purines alkylées et désaminées telles que la 3‑méthyladénine et l’hypoxanthine. En générant des sites abasiques ensuite pris en charge par des endonucléases AP, des polymérases et des ligases, APNG contribue au maintien de la stabilité du génome pendant la réplication et en réponse aux dommages de l’ADN d’origine endogène ou environnementale. L’activité de MPG s’articule avec les réponses cellulaires au stress oxydant et au stress réplicatif, influençant l’accumulation de mutations et l’intégrité chromosomique. Une capacité BER dérégulée, notamment via une altération de la fonction ou de l’expression d’APNG, a été associée à des phénotypes d’instabilité génomique observés dans plusieurs contextes liés à des maladies, faisant de MPG une cible utile pour des études mécanistiques de la réparation de l’ADN.
APNG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MPG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MPG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MPG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MPG.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.