APLNR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402374-ACT

APLNR codifica o recetor de apelina (também conhecido como APJ), um recetor acoplado à proteína G da classe A ativado pelos ligandos peptídicos apelina e ELA/Toddler. A sinalização de APLNR regula o desenvolvimento vascular e a função endotelial, com ativação a jusante de vias como PI3K–AKT, ERK/MAPK, mobilização de cálcio e produção de óxido nítrico, que moldam programas angiogénicos, metabólicos e contráteis. Para além das funções na homeostase cardiovascular e de fluidos, a atividade de APLNR tem sido associada à modulação da migração celular e da sinalização inflamatória em múltiplos contextos tecidulares. A desregulação da sinalização do eixo APLNR–apelina está associada a fenótipos cardiometabólicos e tem sido investigada na remodelação vascular e na biologia do microambiente tumoral, reforçando a sua relevância para estudos mecanísticos.

APLNR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de APLNR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

APLNR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus APLNR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição APLNR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de APLNR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus APLNR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de APLNR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via APLNR em células tumorais com expressão de APLNR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.