API5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406608

Descripción general

API5 (inhibidor de la apoptosis 5) codifica una proteína nuclear que contribuye a la supervivencia celular al modular la señalización apoptótica y favorecer la tolerancia al estrés celular. API5 se ha relacionado con la regulación de programas transcripcionales dependientes de E2F, la progresión del ciclo celular y el mantenimiento de la capacidad proliferativa, con interacciones descritas que influyen en procesos asociados a la cromatina. La expresión alterada de API5 se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos oncogénicos, como una mayor resistencia a la apoptosis y cambios en el control del crecimiento. Por ello, API5 es una diana útil para desentrañar mecanismos de señalización de supervivencia, regulación transcripcional y transiciones del estado celular asociadas a tumores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO API5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen API5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del API5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de API5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína API5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en API5 para la investigación de la señalización de API5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de API5 críticos para la función de API5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de API5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido API5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido API5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus API5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR API5 (h) y el plásmido HDR API5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología API5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana API5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.