APEG1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419147

Descripción general

Speg codifica APEG1, una proteína quinasa de serina/treonina enriquecida en músculo estriado, implicada en la organización del citoesqueleto y el acoplamiento excitación–contracción. APEG1 se asocia con la integridad de las miofibrillas y la homeostasis de las tríadas y de las membranas de unión, vinculando la señalización mediada por quinasas con el ensamblaje del sarcómero y los procesos de manejo del calcio en cardiomiocitos y fibras musculares esqueléticas. La alteración de las vías dependientes de Speg se ha relacionado con defectos en el desarrollo muscular y en la función contráctil, lo que la hace relevante para estudiar los mecanismos subyacentes a fenotipos de cardiomiopatía y miopatía en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO APEG1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Speg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Speg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Speg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína APEG1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Speg para la investigación de la señalización de APEG1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Speg críticos para la función de APEG1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Speg para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido APEG1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido APEG1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Speg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR APEG1 (m) y el plásmido HDR APEG1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Speg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Speg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.