Plásmido Doble Nickase (h) ANT2: sc-400680-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ANT2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ANT2 (h) y el plásmido de doble nickasa ANT2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SLC25A5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ANT2 Anticuerpo (F-7): sc-518109
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ANT2 | sc-400680-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ANT2 | sc-400680-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC25A5 codifica la translocasa de nucleótidos de adenina 2 (ANT2), un transportador mitocondrial de ADP/ATP de la membrana interna que intercambia ADP citosólico por ATP de la matriz, acoplando la fosforilación oxidativa a la demanda energética celular. ANT2 contribuye al transporte de metabolitos mitocondriales, a la regulación del potencial de membrana y a la integración de la señalización bioenergética con respuestas al estrés, incluyendo conexiones con la transición de permeabilidad y vías relacionadas con la apoptosis. Su expresión suele asociarse a estados proliferativos y con metabolismo reprogramado, lo que la hace relevante para estudios de disfunción mitocondrial, alteraciones del metabolismo energético y cambios asociados a enfermedad en los programas de supervivencia celular. Investigar ANT2 ayuda a definir cómo el intercambio de nucleótidos influye en la homeostasis mitocondrial, el equilibrio redox y las redes de señalización del crecimiento.
ANT2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLC25A5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLC25A5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLC25A5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLC25A5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.