Plasmide CRISPR/Cas9 KO ANT2 (h): sc-400680

Présentation

SLC25A5 code l’adénine nucléotide translocase 2 (ANT2), un transporteur de la membrane interne mitochondriale qui échange l’ADP et l’ATP entre la matrice et le cytosol, reliant ainsi la phosphorylation oxydative aux besoins énergétiques de la cellule. ANT2 contribue à l’homéostasie du potentiel de membrane mitochondriale et est fonctionnellement associée à des voies qui régulent la bioénergétique, l’équilibre rédox et la survie cellulaire, notamment la transition de perméabilité et la signalisation apoptotique. Isoforme humaine largement exprimée et soumise à une régulation dépendante du contexte, ANT2 est fréquemment étudiée dans les états prolifératifs et le remodelage métabolique, où des variations des flux ATP/ADP influencent la croissance et les réponses au stress. La dérégulation du transport mitochondrial des nucléotides et de l’activité de la famille ANT est associée à des phénotypes de dysfonction mitochondriale et a été étudiée dans des contextes de recherche allant du métabolisme du cancer aux maladies neuromusculaires et neurodégénératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ANT2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC25A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC25A5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC25A5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ANT2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC25A5 pour l'étude de la signalisation de ANT2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC25A5 essentiels à la fonction de ANT2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC25A5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ANT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ANT2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC25A5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ANT2 plasmide HDR (h) et le ANT2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC25A5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC25A5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.