Particules Lentivirales d'Activation (m2) ANP32A: sc-419111-LAC-2

Le gène murin Anp32a code ANP32A, une phosphoprotéine nucléaire acide conservée qui agit comme chaperon d’histones et modulateur de l’organisation de la chromatine, influençant la régulation transcriptionnelle et la progression du cycle cellulaire. ANP32A participe à des processus nucléaires, notamment le traitement de l’ARNm et des voies de signalisation associées à la protéine phosphatase 2A (PP2A), et a été impliquée dans le contrôle de l’apoptose et des réponses au stress cellulaire via des interactions avec des complexes protéiques régulateurs. Une activité altérée d’ANP32A a été associée à des phénotypes pertinents pour la neurodégénérescence, la biologie tumorale et la signalisation inflammatoire, ce qui en fait un locus utile pour étudier les relations génotype–phénotype dans des modèles murins. L’édition génétique d’Anp32a permet d’explorer les mécanismes de la régulation épigénétique, les réseaux de signalisation nucléaires et des voies liées aux maladies, dans des cellules primaires comme dans des systèmes in vivo.

Les particules d'activation lentivirales ANP32A (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Anp32a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ANP32A (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Anp32a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ANP32A. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Anp32a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.