Plasmide CRISPR/Cas9 KO ANO1 (h2): sc-401314-KO-2

Présentation

ANO1 (TMEM16A) code un canal chlore activé par le Ca²⁺ qui régule le transport épithélial des ions et des fluides, l’excitabilité du muscle lisse et la transduction des signaux sensoriels. L’activité du canal couple les signaux intracellulaires de Ca²⁺ à la dépolarisation membranaire et au flux de chlorure, modulant ainsi des processus tels que les sécrétions des voies aériennes et du tractus gastro-intestinal, ainsi que la modulation de l’activité de décharge des neurones. ANO1 participe à des réseaux de signalisation en aval de l’activation de la phospholipase C induite par les récepteurs et de la libération de Ca²⁺, et il influence la motilité cellulaire et la dynamique membranaire dans de multiples contextes tissulaires. Une expression ou une activité d’ANO1 dérégulée a été associée à des phénotypes d’excitabilité et de sécrétion altérés, et ANO1 a été fréquemment étudié en oncologie et dans des contextes inflammatoires en tant que facteur contribuant à des programmes aberrants de prolifération et de migration cellulaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ANO1 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ANO1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ANO1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ANO1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ANO1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ANO1 pour l'étude de la signalisation de ANO1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ANO1 essentiels à la fonction de ANO1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ANO1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ANO1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ANO1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ANO1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ANO1 plasmide HDR (h) et le ANO1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ANO1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ANO1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.