Annexin III Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403572-ACT

O gene humano ANXA3 codifica a anexina III, uma proteína de ligação a fosfolipídios dependente de cálcio que se associa às membranas celulares e contribui para a organização de membranas, o tráfego vesicular e a dinâmica do citoesqueleto. A anexina III tem sido associada à regulação da sinalização inflamatória e das funções de células imunes inatas, incluindo processos relevantes para a biologia de grânulos e a remodelação de membranas. A expressão alterada de ANXA3 é frequentemente relatada em estudos de oncologia e de inflamação, nos quais se correlaciona com mudanças na proliferação celular, migração e respostas ao estresse. Essas características tornam o ANXA3 um nó útil para investigar a sinalização próxima à membrana e vias regulatórias dependentes de lipídios.

Annexin III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ANXA3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Annexin III O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ANXA3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ANXA3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Annexin III. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ANXA3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Annexin III no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Annexin III em células tumorais com expressão de ANXA3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.