Plásmido CRISPR de Activación (h) ANKRD50: sc-412772-ACT

El ANKRD50 humano codifica una proteína con repeticiones de anquirina implicada en el tráfico endosomal y en la clasificación de proteínas de membrana, lo que contribuye al control espacial de receptores de señalización y transportadores. Las funciones descritas relacionan a ANKRD50 con redes reguladoras asociadas a endosomas que influyen en el reciclaje de receptores, la dinámica vesicular y el ajuste fino de vías de señalización aguas abajo, incluidos procesos que modulan las respuestas a factores de crecimiento y señales inmunitarias. A través de estas funciones, ANKRD50 es relevante para estudios de homeostasis celular, proteostasis y fidelidad de la transducción de señales tanto en contextos diferenciados como proliferativos. La alteración del tráfico endomembranoso es una característica común en múltiples mecanismos de enfermedad, lo que convierte a ANKRD50 en un objetivo útil para analizar cómo las perturbaciones del tráfico remodelan los estados de señalización celular.

ANKRD50 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ANKRD50 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ANKRD50 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ANKRD50 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ANKRD50, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ANKRD50. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ANKRD50 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ANKRD50 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ANKRD50 en células tumorales con expresión de ANKRD50 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.