Plásmido CRISPR de Activación (m) Androgen Receptor: sc-419181-ACT

Mouse **Ar** codifica el receptor de andrógenos, un factor de transcripción nuclear activado por ligando que se une a andrógenos y regula programas de expresión génica que controlan el desarrollo reproductivo, la diferenciación sexual y el metabolismo anabólico. Tras su activación, el receptor de andrógenos se trasloca al núcleo, se une a elementos de respuesta a andrógenos e interactúa con complejos de remodelación de la cromatina y co-reguladores para modular redes transcripcionales que gobiernan la proliferación celular, la diferenciación y la homeostasis tisular. La señalización del AR se interseca con las vías PI3K/AKT, MAPK y Wnt/β-catenina, configurando retroalimentación sobre la esteroidogénesis y las respuestas a factores de crecimiento en múltiples órganos. La actividad desregulada del AR está implicada en fenotipos endocrinos y reproductivos y proporciona un vínculo mecanístico con la patobiología dependiente de hormonas, lo que convierte a **Ar** en un nodo central para estudiar el control transcripcional por receptores nucleares *in vivo* y en modelos celulares.

Androgen Receptor El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Ar sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Androgen Receptor El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Ar en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Ar, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Androgen Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Ar y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Androgen Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Androgen Receptor en células tumorales con expresión de Ar silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.