Particules Lentivirales d'Activation (h) AMPKγ1: sc-418058-LAC

PRKAG1 code la sous-unité régulatrice γ1 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur central de l’état énergétique qui couple les niveaux cellulaires d’AMP/ADP à l’adaptation métabolique. En modulant l’activation d’AMPK aux côtés des sous-unités catalytique α et d’échafaudage β, AMPKγ1 influence des voies qui contrôlent l’absorption du glucose, l’oxydation des acides gras, l’homéostasie mitochondriale et l’autophagie, avec des effets en aval sur mTOR et d’autres réseaux de détection des nutriments apparentés. La signalisation d’AMPK dépendante de PRKAG1 est largement impliquée dans les réponses au stress cellulaire et la reprogrammation métabolique, des processus fréquemment étudiés dans des contextes tels que la biologie cardiométabolique et le métabolisme des cellules cancéreuses. Une activité altérée de l’axe AMPK peut affecter le contrôle de la croissance et la survie en situation de stress énergétique, ce qui fait de PRKAG1 une cible utile pour disséquer ces voies.

Les particules d'activation lentivirales AMPKγ1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRKAG1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AMPKγ1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRKAG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AMPKγ1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRKAG1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.