Plasmide Double Nickase (h) AMPK alpha 1: sc-400104-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) AMPK alpha 1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide AMPK alpha 1 Double Nickase (h) et le plasmide AMPK alpha 1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRKAA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: AMPK alpha 1 Antibody (H-4): sc-398861
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) AMPK alpha 1 | sc-400104-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) AMPK alpha 1 | sc-400104-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRKAA1 code la sous-unité catalytique α1 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur central de l’état énergétique cellulaire, activé par l’augmentation des niveaux d’AMP/ADP et par des kinases amont telles que LKB1 et CAMKK2. AMPKα1 coordonne l’adaptation métabolique en régulant l’absorption du glucose et la glycolyse, en inhibant les programmes anaboliques via la suppression de mTORC1, et en favorisant l’autophagie ainsi que l’homéostasie mitochondriale par phosphorylation d’effecteurs en aval. Par ces activités, la signalisation AMPK module les réponses au stress nutritionnel, à l’hypoxie et au stress oxydatif, influençant la croissance cellulaire, le métabolisme lipidique et la signalisation inflammatoire. Une activité dérégulée de PRKAA1/AMPKα1 a été associée à des phénotypes de maladies métaboliques et est fréquemment étudiée en biologie du cancer, où la reprogrammation métabolique influence la prolifération et la survie.
AMPK alpha 1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRKAA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRKAA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRKAA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRKAA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.