Amphiregulin Lentiviral Activation Particles (h): sc-400987-LAC

AREG kodiert Amphiregulin, einen sezernierten Liganden des epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptors (EGFR/ErbB1), der als Reaktion auf Gewebeschädigung und entzündliche Signale von Epithelzellen, Fibroblasten und verschiedenen Immunzell-Subtypen produziert wird. Nach Bindung an EGFR fördert Amphiregulin die Dimerisierung des Rezeptors und aktiviert nachgeschaltete MAPK/ERK-, PI3K/AKT- und JAK/STAT-Signalwege, wodurch Zellproliferation, Überleben und Gewebeumbau koordiniert werden. Die AREG-Expression wird häufig durch zytokin- und stressresponsive Transkriptionsprogramme induziert und trägt zur parakrinen Signalübertragung in lokalen Mikroumgebungen bei. Eine fehlregulierte Amphiregulin–EGFR-Signalgebung wurde mit pathologischen Entzündungen, Fibrose und onkogenen Prozessen in Verbindung gebracht, was AREG zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur epithelial-stromalen Crosstalk-Kommunikation und zur Regulation durch die Mikroumgebung macht.

Amphiregulin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente AREG-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Amphiregulin Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der AREG-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Amphiregulin-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen AREG-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.