Plasmide CRISPR/Cas9 KO Amphiphysin II (h): sc-401263

Présentation

BIN1 code l’amphiphysine II, une protéine à domaine BAR capable de détecter la courbure membranaire, qui coordonne l’endocytose médiée par la clathrine, la biogenèse des tubules T et le remodelage des membranes via des interactions avec la dynamine, les phosphoinositides et le cytosquelette d’actine. Dans les cellules humaines, BIN1 contribue au maintien de l’homéostasie du trafic et de la signalisation en couplant la fission des vésicules à l’organisation du cytosquelette, avec des fonctions dépendantes des isoformes dans les contextes musculaire et nerveux. Des modifications génétiques et d’expression de BIN1 ont été associées à des myopathies, dont la myopathie centronucléaire, et BIN1 est également impliqué dans des voies liées à la neurodégénérescence, telles que le trafic endosomal et des processus associés à l’amyloïde, pertinents pour la maladie d’Alzheimer. Ces rôles font de l’amphiphysine II un nœud utile pour étudier la dynamique membranaire, la biologie synaptique et l’architecture des cellules musculaires.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Amphiphysin II (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BIN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BIN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BIN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Amphiphysin II.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BIN1 pour l'étude de la signalisation de Amphiphysin II, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BIN1 essentiels à la fonction de Amphiphysin II
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BIN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Amphiphysin II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Amphiphysin II plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BIN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Amphiphysin II plasmide HDR (h) et le Amphiphysin II (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BIN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BIN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.