AMIGO2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403312-ACT

AMIGO2 (molécula de adesão com domínio semelhante a Ig 2) é uma proteína transmembranar tipo I, de superfície celular, da família AMIGO, que dá suporte a interações célula–célula, ao crescimento de neuritos e ao direcionamento axonal durante o desenvolvimento do sistema nervoso. Em células humanas, o AMIGO2 tem sido associado à regulação de sinalização dependente de adesão, migração e programas de sobrevivência que se conectam à remodelação do citoesqueleto e a vias mediadas por receptores. Alterações na expressão de AMIGO2 foram relatadas em contextos de progressão tumoral e fenótipos associados à metástase, nos quais mudanças na adesão e na motilidade podem remodelar a arquitetura dos tecidos. Essas características tornam o AMIGO2 um alvo útil para estudar como sinais extracelulares são acoplados à sinalização intracelular e a estados de diferenciação.

AMIGO2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AMIGO2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AMIGO2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AMIGO2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AMIGO2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AMIGO2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AMIGO2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AMIGO2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AMIGO2 em células tumorais com expressão de AMIGO2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.