Plasmide CRISPR/Cas9 KO ALX4 (m): sc-419095

Présentation

Alx4 code le facteur de transcription homéobox ALX4, un régulateur nucléaire des programmes d’expression génique du développement qui façonnent la mise en place cranio-faciale, la morphogenèse des membres et du squelette, ainsi que la différenciation mésenchymateuse. ALX4 influence des réseaux transcriptionnels contrôlant la prolifération et l’identité positionnelle, en interaction avec des voies impliquées dans l’engagement de la lignée ostéogénique et la formation des frontières tissulaires. Dans des modèles murins, une altération de la fonction d’Alx4 est associée à des défauts de développement de la voûte crânienne, à des malformations cranio-faciales et à des anomalies de la mise en place des doigts, ce qui étaye son intérêt comme nœud d’étude de la morphogenèse congénitale. Ces caractéristiques font d’ALX4 une cible pertinente pour l’étude des circuits de régulation génique sous-jacents au développement squelettique et aux phénotypes développementaux associés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ALX4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Alx4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Alx4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Alx4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ALX4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Alx4 pour l'étude de la signalisation de ALX4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Alx4 essentiels à la fonction de ALX4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Alx4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ALX4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ALX4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Alx4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ALX4 plasmide HDR (m) et le ALX4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Alx4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Alx4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.