ALPPL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401492-ACT

ALPPL2 codifica a fosfatase alcalina semelhante à placentária 2, uma ectoenzima ancorada por glicosilfosfatidilinositol (GPI) expressa na superfície celular, onde hidrolisa monoésteres de fosfato e pode modular a disponibilidade extracelular de nucleotídeos e fosfato. Por meio de sua localização na membrana e de sua atividade enzimática, a ALPPL2 está associada a processos que incluem diferenciação epitelial, organização de microdomínios de membrana e regulação de ambientes de sinalização na membrana plasmática. Alterações na expressão de fosfatases alcalinas semelhantes à placentária têm sido relatadas em contextos de transformação celular e mudanças de estado de linhagem, sustentando o uso de ALPPL2 como um marcador funcional em estudos de biologia tumoral e identidade celular. Seu padrão de expressão fisiológica mais restrito, em comparação com fosfatases alcalinas ubíquas, torna a ALPPL2 relevante para investigar programas de expressão de antígenos associados ao câncer e a remodelação do meio extracelular dependente de fosfatase.

ALPPL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ALPPL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ALPPL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ALPPL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ALPPL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ALPPL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ALPPL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ALPPL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ALPPL2 em células tumorais com expressão de ALPPL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.