Plásmido Doble Nickase (h) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-400239-NIC

ATP1A1 codifica la subunidad catalítica α1 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, una ATPasa tipo P esencial que utiliza la hidrólisis de ATP para exportar Na⁺ e importar K⁺ a través de la membrana plasmática. Al mantener los gradientes iónicos, ATP1A1 contribuye al potencial de membrana en reposo, al control del volumen celular, al transporte activo secundario y a la excitabilidad, y también influye en vías de señalización relacionadas con la adhesión, la organización del citoesqueleto y las respuestas al estrés. La actividad de la Na⁺/K⁺-ATPasa α1 es clave para la fisiología epitelial y neuronal y contribuye a programas de homeostasis iónica que determinan la demanda metabólica y el manejo del Ca²⁺. La desregulación de la función o la expresión de ATP1A1 se ha asociado con cambios en la excitabilidad y en fenotipos de transporte en contextos relevantes para enfermedad, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la fisiología de membrana y el crosstalk entre vías de señalización.

alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP1A1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP1A1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP1A1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP1A1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.