ALP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401877

Descripción general

PDLIM3 codifica ALP (proteína LIM asociada a actinina), un adaptador de la familia PDZ-LIM enriquecido en músculo estriado que se localiza en el disco Z y conecta los filamentos de actina basados en α-actinina con complejos de señalización. A través de sus dominios PDZ y LIM, ALP favorece el ensamblaje del sarcómero, la mecanotransducción y la organización del citoesqueleto al actuar como plataforma (andamiaje) de interacciones proteicas que coordinan la dinámica de la actina y las vías de respuesta al estrés. La alteración de la expresión de PDLIM3 o la disrupción de la integridad del disco Z se asocia con una arquitectura miofibrilar deteriorada y se ha estudiado en el contexto de la cardiomiopatía y la disfunción del músculo esquelético. Como marcador de la homeostasis estructural muscular, ALP es relevante para investigar cómo los andamios del citoesqueleto ajustan la función contráctil, la adhesión celular y la señalización de estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ALP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PDLIM3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PDLIM3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PDLIM3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ALP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PDLIM3 para la investigación de la señalización de ALP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PDLIM3 críticos para la función de ALP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PDLIM3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ALP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ALP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PDLIM3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ALP (h) y el plásmido HDR ALP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PDLIM3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PDLIM3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.