Alix Double Nickase Plasmid (h): sc-400350-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Alix Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Alix Double-Nickase-Plasmid (h) und Alix Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PDCD6IP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Alix: sc-53540
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Alix Double Nickase Plasmid (h) | sc-400350-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Alix Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400350-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PDCD6IP kodiert Alix, ein ESCRT-assoziiertes Adapterprotein, das Membran-Remodellierungsprozesse koordiniert, darunter die Biogenese multivesikulärer Körperchen, die Sortierung endosomaler Fracht und die Exosomen-Biogenese. Alix interagiert mit Komponenten von ESCRT‑I/III sowie mit Partnern wie TSG101 und CHMP4, um die Abtrennung (Abszission) während der Zytokinese, die Reparatur der Plasmamembran und die Herunterregulierung von Rezeptoren zu unterstützen, wodurch es mit Ausgängen von Wachstumsfaktor- und Immun-Signalwegen verknüpft ist. Aufgrund seiner Funktionen im endolysosomalen Transport und in Abschnürungsprozessen wird Alix häufig im Zusammenhang mit viralem Austritt, autophagiebezogenen Membrandynamiken und neuronaler Homöostase untersucht. Eine Fehlregulation des PDCD6IP-abhängigen Transports wurde mit veränderter Signalübertragung durch extrazelluläre Vesikel und mit Proteostase‑Signalwegen in Verbindung gebracht, die für Krebsbiologie, Neurodegeneration und entzündliche Zustände relevant sind.
Alix Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PDCD6IP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PDCD6IP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PDCD6IP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PDCD6IP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.