Aldolase B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432929

Übersicht

Aldob codiert für Aldolase B, ein glykolytisches und fructolytisches Enzym, das Fructose-1,6-bisphosphat und Fructose-1-phosphat spaltet und dabei Triosephosphate erzeugt. Dadurch verknüpft es den Kohlenhydratabbau mit der nachgeschalteten Energiegewinnung und biosynthetischen Stoffflusswegen. In der Maus ist die Aldolase‑B‑Aktivität vor allem in Hepatozyten und in Zellen des proximalen Nierentubulus ausgeprägt und unterstützt die hepatische Glukosehomöostase, den Fructosestoffwechsel sowie die metabolische Anpassung während Fasten‑ und Fütterungszyklen. Eine Störung der ALDOB‑Funktion ist klassischerweise mit einer beeinträchtigten Fructoseverwertung und umfassenderen Verschiebungen im Gleichgewicht zwischen Glykolyse und Glukoneogenese verbunden, was sie für die Untersuchung von Stoffwechselstress‑Antworten und der Hepatozytenphysiologie relevant macht. Aldob stellt zudem einen gut zugänglichen Ansatzpunkt dar, um die Signalweg‑Wechselwirkungen zwischen Glykolyse, Glukoneogenese und fructosegetriebener Signalübertragung in leberzentrierten Krankheitsmodellen zu untersuchen.

Das Aldolase B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aldob-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aldob-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aldob nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldolase B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aldob-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldolase B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aldob-Exone abzielen, die für die Aldolase B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aldob-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldolase B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aldolase B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aldob-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldolase B HDR-Plasmid (m) und Aldolase B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aldob-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aldob-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.