ALDH1L2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406648

Descripción general

ALDH1L2 codifica una aldehído deshidrogenasa mitocondrial que actúa como deshidrogenasa de 10-formiltetrahidrofolato, apoyando el metabolismo del folato de un carbono y la homeostasis redox dentro de las mitocondrias. Al regular el recambio de formil-THF y las reacciones ligadas a NADP(H), ALDH1L2 influye en la capacidad de biosíntesis de nucleótidos, el equilibrio oxidativo mitocondrial y las respuestas celulares al estrés metabólico. La alteración del flujo mitocondrial de un carbono puede remodelar las demandas anabólicas y el manejo de las especies reactivas de oxígeno, procesos que con frecuencia se ven modificados en estados celulares proliferativos y adaptados al estrés. En consecuencia, ALDH1L2 se estudia en el contexto de la reprogramación metabólica, la función mitocondrial y los cambios asociados a enfermedad en vías dependientes del folato.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ALDH1L2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALDH1L2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALDH1L2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALDH1L2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ALDH1L2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALDH1L2 para la investigación de la señalización de ALDH1L2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALDH1L2 críticos para la función de ALDH1L2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALDH1L2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ALDH1L2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALDH1L2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ALDH1L2 (h) y el plásmido HDR ALDH1L2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALDH1L2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALDH1L2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.