Plasmide Double Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1: sc-402168-NIC

ALDH3A1 code l’aldéhyde déshydrogénase 3A1, une enzyme cytosolique dépendante du NAD(P)+ qui oxyde des aldéhydes aliphatiques et aromatiques réactifs en leurs acides carboxyliques correspondants. En détoxifiant les sous-produits de la peroxydation lipidique et les aldéhydes exogènes, ALDH3A1 contribue à l’homéostasie redox, limite la formation d’adduits aldéhyde‑protéine et participe à la défense cellulaire contre le stress oxydant et électrophile. Son activité s’inscrit dans le métabolisme plus large des aldéhydes, les réseaux antioxydants dépendants du glutathion et les programmes transcriptionnels de réponse au stress. Des altérations de l’expression ou de la fonction d’ALDH3A1 ont été étudiées dans des contextes d’adaptation des épithéliums au stress, de dommages associés à l’inflammation et de remodelage métabolique lié à la carcinogenèse.

Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALDH3A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALDH3A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALDH3A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALDH3A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.