Plásmido Doble Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2: sc-400809-NIC

ALDH2 codifica la enzima mitocondrial aldehído deshidrogenasa 2, un catalizador clave en la oxidación dependiente de NAD(P)+ de aldehídos reactivos generados por el metabolismo del etanol y la peroxidación lipídica. Al eliminar el acetaldehído y aldehídos tóxicos derivados de lípidos como el 4‑hidroxinonenal, ALDH2 contribuye al equilibrio redox mitocondrial, limita el estrés oxidativo y protege proteínas y membranas de la formación de aductos con aldehídos. La actividad de ALDH2 se relaciona con el control de calidad mitocondrial, la señalización por ROS y vías más amplias del metabolismo de xenobióticos y del metabolismo intermediario. La alteración de la función de ALDH2 se ha asociado con una susceptibilidad diferencial al daño celular inducido por aldehídos y se estudia con frecuencia en contextos que incluyen el estrés tisular relacionado con el alcohol, fenotipos cardiometabólicos y mecanismos de enfermedades neurodegenerativas.

Aldehyde dehydrogenase 2/ALDH2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALDH2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALDH2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALDH2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALDH2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.