Plasmide Double Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 1B1/ALDH1B1: sc-404562-NIC

L’ALDH1B1 humaine code une aldéhyde déshydrogénase mitochondriale qui oxyde un large éventail d’aldéhydes endogènes et xénobiotiques en leurs acides carboxyliques correspondants en utilisant le NAD(P)+, contribuant ainsi à l’équilibre rédox cellulaire et à la détoxification des aldéhydes. En limitant l’accumulation d’aldéhydes réactifs générés lors de la peroxydation lipidique et du métabolisme intermédiaire, ALDH1B1 participe à l’homéostasie mitochondriale et à la protection contre le stress carbonylé. Son activité recoupe la prise en charge de l’éthanol/acétaldéhyde, le métabolisme d’aldéhydes liés aux rétinoïdes, ainsi que les voies de réponse au stress oxydant qui influencent la prolifération, la différenciation et l’adaptation métabolique. Des modifications de l’expression d’ALDH1B1 et des programmes enzymatiques des ALDH ont été associées à la biologie tumorale et à des phénotypes métaboliques, ce qui motive des études fonctionnelles dans des modèles de cancer, d’inflammation et de dysfonction mitochondriale.

Aldehyde dehydrogenase 1B1/ALDH1B1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALDH1B1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALDH1B1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALDH1B1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALDH1B1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.