Plasmide Double Nickase (h) Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1: sc-400782-NIC

L’ALDH1A1 humaine code une aldéhyde déshydrogénase cytosolique dépendante du NAD(P)+, qui oxyde des aldéhydes endogènes et xénobiotiques en leurs acides carboxyliques correspondants, contribuant ainsi à la détoxification cellulaire et à l’homéostasie rédox. Elle joue un rôle central dans le métabolisme des rétinoïdes en convertissant le rétinaldéhyde en acide rétinoïque, reliant l’activité d’ALDH1A1 à des programmes transcriptionnels qui influencent la différenciation et les réponses au stress. L’expression et l’activité enzymatique d’ALDH1A1 sont fréquemment utilisées comme indicateurs fonctionnels dans les études de biologie épithéliale et de plasticité cellulaire, et une régulation altérée a été associée, dans des contextes pathologiques, à l’adaptation métabolique et à la gestion du stress oxydant. Ces propriétés font d’ALDH1A1 un élément largement étudié au sein des voies qui contrôlent l’élimination des aldéhydes, la signalisation de l’acide rétinoïque et la résilience cellulaire.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALDH1A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALDH1A1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALDH1A1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALDH1A1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.