Plasmide CRISPR d'Activation (h) Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1: sc-400782-ACT

L’ALDH1A1 humain code l’aldéhyde déshydrogénase cytosolique 1-A1, une enzyme dépendante du NAD(P)+ qui oxyde des aldéhydes aliphatiques et aromatiques réactifs en leurs acides carboxyliques correspondants, contribuant à la détoxification cellulaire et à l’homéostasie rédox. ALDH1A1 est un composant clé du métabolisme des rétinoïdes via la conversion du rétinaldéhyde en acide rétinoïque, ce qui la relie à des programmes transcriptionnels contrôlant la différenciation, le maintien épithélial et l’adaptation métabolique. En limitant les dommages causés par les aldéhydes issus de la peroxydation lipidique et en modulant la signalisation de l’acide rétinoïque, ALDH1A1 influence les réponses au stress oxydant et les voies de traitement des xénobiotiques. Une expression dérégulée d’ALDH1A1 a été associée à des états de différenciation altérés, à une reprogrammation métabolique et à des phénotypes de tolérance au stress dans divers modèles cellulaires pertinents pour l’étude des maladies.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ALDH1A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ALDH1A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ALDH1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ALDH1A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ALDH1A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.