AK4 Lentiviral Activation Particles (h): sc-416951-LAC

Das humane AK4-Gen kodiert die Adenylatkinase 4, ein mitochondriales Enzym, das die Homöostase von Adeninnukleotiden reguliert, indem es die reversible Phosphatübertragung zwischen AMP, ADP und ATP katalysiert. Über seine Funktion bei der Aufrechterhaltung des zellulären Energiegleichgewichts beeinflusst AK4 den mitochondrialen Stoffwechsel, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie apoptosisbezogene Prozesse, die den bioenergetischen Zustand mit Entscheidungen über das Zellüberleben verknüpfen. Eine veränderte AK4-Expression wird mit der metabolischen Umprogrammierung und Stressanpassung in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter die Krebsbiologie und Modelle von Gewebeschädigung. Als mitochondrialer Regulator wird AK4 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Hypoxiesignalisierung, dem Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und der mitochondrialen Qualitätskontrolle zusammenhängen.

AK4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente AK4-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

AK4 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der AK4-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen AK4-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen AK4-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.