AIM1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410680-ACT

Absent in Melanoma 1 (AIM1) kodiert ein zytoskelettassoziiertes Protein, das an der Aufrechterhaltung der zellulären Architektur beteiligt ist und aktinverknüpfte Prozesse reguliert, die Adhäsion, Migration und Gewebeorganisation beeinflussen. Expressionsmuster von AIM1 wurden mit zellulären Differenzierungszuständen und Veränderungen des invasiven Verhaltens in Verbindung gebracht, was mit Funktionen in der Zytoskelett-Remodellierung und stressresponsiver Signalgebung übereinstimmt. Eine Fehlregulation von AIM1 wurde in mehreren Krebskontexten beschrieben, wobei eine veränderte Expression mit Tumorprogression und metastatischem Potenzial korrelieren kann. Diese Merkmale machen AIM1 zu einem nützlichen Ziel, um zu untersuchen, wie zytoskelettale Integrität und transkriptionelle Programme zusammenwirken und den Zellphänotyp prägen.

AIM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen AIM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

AIM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des AIM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der AIM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen AIM1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native AIM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von AIM1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des AIM1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem AIM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.