Ah Receptor Lentiviral Activation Particles (m): sc-419054-LAC

Das murine Ahr-Gen kodiert den Aryl-Hydrocarbon-Rezeptor (AhR), einen ligandenaktivierten Transkriptionsfaktor, der als zentraler Umweltsensor fungiert und die Exposition gegenüber Xenobiotika mit einer transkriptionellen Reprogrammierung verknüpft. Nach der Aktivierung transloziert AhR in den Zellkern, heterodimerisiert mit ARNT und bindet an Xenobiotic Response Elements, um Gene der Phase-I/II-Metabolisierung wie Cytochrom-P450-Enzyme zu regulieren, wobei er Schnittstellen zu Signalwegen des oxidativen Stresses und der Entzündung aufweist. Über die Entgiftung hinaus beeinflusst AhR die Differenzierung von Immunzellen, die Aufrechterhaltung epithelialer Barrieren und Entwicklungsprozesse über Crosstalk mit NF-κB-, Wnt/β-Catenin- und zirkadianen Regulationsnetzwerken. Eine fehlregulierte AhR-Signalübertragung wird mit toxikologischen Reaktionen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten wie Barrierefunktionsstörungen, immunvermittelter Pathologie und transkriptionsbasierten Programmen der Karzinogenese untersucht.

Ah Receptor Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Ahr-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

Ah Receptor Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Ahr-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen Ah Receptor-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Ahr-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.